酶标仪如何测定黄曲霉毒素

        使用酶标仪测定黄曲霉毒素，常采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法，以下是具体的操作步骤：

        样品准备：称取一定量的食用油或其他含油食品样品，用适当的提取溶剂（如甲醇 - 水混合溶液，常见比例为 7:3）进行提取。将样品充分振荡、离心，使黄曲霉毒素溶解在提取液中。然后取一定量的上清液，根据需要进行适当稀释，以确保后续检测时样品中黄曲霉毒素的浓度在标准曲线范围内。

        试剂准备：准备黄曲霉毒素 ELISA 检测试剂盒，该试剂盒通常包含包被有黄曲霉毒素抗原的微孔板、黄曲霉毒素标准品（不同浓度梯度，如 0、5、10、20、50、100 ng/mL 等）、酶标记物（一般是酶标记的抗黄曲霉毒素抗体）、洗涤液、底物溶液和终止液等。

        加样：在微孔板中加入不同浓度的黄曲霉毒素标准品，每个浓度设置至少 2 个平行孔，作为标准曲线的参考点。同时，加入适量的处理好的样品溶液到相应的孔中，同样设置平行孔。另外，还需设置空白对照孔（通常加入等量的提取溶剂或稀释液）和阴性对照孔（加入已知不含黄曲霉毒素的样品提取液）。

        温育反应：将微孔板放入恒温培养箱中，在适宜的温度（如 37℃）下温育一定时间（如 30 分钟至 1 小时），使样品中的黄曲霉毒素与包被在微孔板上的抗原充分竞争结合有限的抗体结合位点。

        洗涤：温育结束后，弃去孔内液体，用洗涤液充分洗涤微孔板，一般洗涤 3-5 次，每次浸泡 1-2 分钟，以去除未结合的物质，减少非特异性吸附带来的干扰。

        加酶标记物：向每个孔中加入适量的酶标记物，使酶标记的抗黄曲霉毒素抗体与结合在微孔板上的黄曲霉毒素发生特异性结合。然后再次将微孔板放入恒温培养箱中，在适宜温度下温育一定时间（如 30 分钟左右）。

        洗涤：重复上述洗涤步骤，彻底洗去未结合的酶标记物。

        加底物显色：向每个孔中加入适量的底物溶液，酶标记物中的酶会催化底物发生显色反应，产生有色物质。在适宜温度下避光反应一定时间（如 15-30 分钟），使颜色充分发展。

        终止反应：加入终止液，终止酶促反应，使颜色稳定下来。此时，溶液的颜色深浅与样品中黄曲霉毒素的含量呈负相关，即样品中黄曲霉毒素含量越高，与包被抗原结合的抗体就越少，酶标记物结合的量也越少，显色反应就越弱，颜色越浅。

        测定吸光度：将微孔板放入酶标仪中，选择合适的波长（一般为 450 nm），测定每个孔的吸光度（OD 值）。

        绘制标准曲线和计算结果：以黄曲霉毒素标准品的浓度为横坐标，对应的平均 OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。根据样品孔的平均 OD 值，从标准曲线上查得对应的黄曲霉毒素浓度，再根据样品的稀释倍数和称样量，计算出样品中黄曲霉毒素的实际含量。

        通过以上步骤，利用酶标仪结合 ELISA 法可以准确测定食品中黄曲霉毒素的含量。

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